平均亲水性及多肽溶解建议:疏水(该多肽在水中的溶解性一般,可选择以下方式助溶: 1、调整溶液的PH助溶(含Cys等氨基酸尽量不调为碱性) 2、超声助溶(含Cys、Ser等氨基酸需减少超声时间) 3、加热助溶(溶液温度≤30℃) 4、添加助溶剂(如DMSO,DMF等,建议遵循先有机溶液后无机溶液的原则)。 5、对于碱性肽,建议用10%乙酸溶解,对于酸性肽,建议用5-10%氨水溶解。
五、多肽Gly-Ala-Val-Leu的亲疏水性氨基酸、极性非极性氨基酸、酸碱性氨基酸的统计(扇形图)
1、合成CTC树脂:称取0.3g CTC Resin(如初始取代度约为1.0mmol/g)和0.4 mmol的Fmoc-Leu-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入树脂0.9 mmol的DIPEA((Mw:129.1,d:0.740g/ml)),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到Fmoc-Leu-CTC Resin备用。结构图如下:
2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到H2N-Leu-CTC Resin。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色)。结构图如下:
3、缩合:取2.7mmol Fmoc-Val-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再分别加入1.8mmol DIPEA,1.67mmol HBTU。反应30分钟后,用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Val-Leu-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:
5、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水沉淀滤液,并用冰无水洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放线小试,得到粗品 Ala-Cys-Asp-Glu-Arg。
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。返回搜狐,查看更多