Rabies Virus Glycoprotein 是由 29 个氨基酸残基构成的细胞穿透肽,来源于狂犬病病毒糖蛋白,它能够穿过血脑屏障,进入脑细胞。
1、合成CTC树脂:称取1.7g CTC Resin(如初始取代度约为0.4mmol/g)和0.1mmol的Fmoc-Gly-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入树脂2.04mmol的DIPEA((Mw:129.1,d:0.740g/ml)),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到Fmoc-Gly-CTC Resin备用。结构图如下:
2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到H2N-Gly-CTC Resin。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色)。结构图如下:
5、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水沉淀滤液,并用冰无水洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放线小试,得到粗品 YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG。
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
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